摘要：目的建立健兒止瀉顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用比色法測(cè)定游離總氨基酸的含量。結(jié)果絲氨酸在0.32～0.60μg與吸收度呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.8%，RSD為2.06%（n=6）。結(jié)論建立的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠，可作為控制該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

　　關(guān)鍵詞：健兒止瀉顆粒；游離總氨基酸；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；比色法

　　健兒止瀉顆粒是由芋頭提取精制而成，具有固脾止瀉、調(diào)整腸功能紊亂、促進(jìn)小腸吸收的功能，并具有營(yíng)養(yǎng)作用。用于嬰幼兒遷延性慢性腹瀉，小兒傷于乳食、寒暖失調(diào)、腸炎后久瀉不愈，醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理腸道正常菌群失調(diào)及營(yíng)養(yǎng)不良的患兒。根據(jù)文獻(xiàn)記載和一些資料報(bào)道，芋頭除含蛋白質(zhì)，淀粉外，還含有游離氨基酸89.8mg/100g，水溶性多糖12.0%等成分。為了有效地控制健兒止瀉顆粒的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用比色法對(duì)所含游離氨基酸進(jìn)行了定量研究。

　　1材料

　　上海分析儀器廠752分光光度計(jì)、玻璃比色皿。試劑與試液均為分析純，水為雙蒸水。

　　2方法

　　2.1溶液的制備絲氨酸對(duì)照品（含量測(cè)定用），由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為624-200104.

　　2.1.12%茚三酮溶液精密稱取茚三酮2.00g溶于60ml熱水中，冷至室溫后，加水定容至100ml，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

　　2.1.2pH8.24的磷酸鹽緩沖液精密稱取磷酸二氫鉀0.4543g，加水溶解并定容至50ml，備用，精密稱取磷酸氫二納2.3880g，加水溶解并定容至100ml，備用，精密量取磷酸二氫鉀溶液5.0ml，加入100ml量瓶中，加磷酸氫二納溶液至刻度，搖勻，即得。

　　2.1.3供試品溶液的制備取供試品6g，研細(xì)，精密稱定0.35g，置25ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

　　2.2含量測(cè)定

　　2.2.1顯色反應(yīng)條件的選擇：pH值的選擇：首先按《中國(guó)藥典》2000版二部附錄項(xiàng)下分別配制pH值分別為3.6，4.5，6.0的醋酸鹽緩沖液和pH值分別為6.5，7.0，8.24的磷酸鹽緩沖液。然后精密量取供試品溶液5.0ml置25ml量瓶中，分別精密加入上述六種緩沖液1.0ml，再加入2%的茚三酮溶液2.0ml和水7.0ml，搖勻，置沸水浴中加熱30min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，加水定容至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，以相應(yīng)的溶劑為空白對(duì)照，在568nm處測(cè)得吸光度。結(jié)果顯色反應(yīng)的pH值為8.24測(cè)得的吸收度最高。2%茚三酮溶液用量的選擇：精密量取供試品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入2%的茚三酮溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml，和pH值為8.24的磷酸鹽緩沖液1.0ml，分別補(bǔ)水至15.0ml，搖勻，置沸水浴中加熱30min，取出，在冷水浴中迅速冷卻至室溫，加水定容至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，以相應(yīng)的溶劑為空白對(duì)照，在568nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果2%茚三酮溶液的用量為2.0ml時(shí)測(cè)得的吸收度最高。顯色反應(yīng)加熱溫度的選擇：精密量取供試品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入緩沖液1.0ml和2%的茚三酮溶液2.0ml以及水7.0ml，搖勻，分別置60℃水浴和沸水浴中加熱20min，取出，在冷水浴中迅速冷卻至室溫，加水定容至刻度，醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理濾過(guò)，取續(xù)濾液以相應(yīng)的溶劑為空白對(duì)照，在568nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果溫度為100℃的沸水浴測(cè)得的吸收值高。顯色反應(yīng)加熱時(shí)間的選擇：精密量取供試品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入2%的茚三酮溶液2.0ml和磷酸鹽緩沖液1.0ml，水7.0ml，搖勻，分別置沸水浴中加熱5，10，15，20，25，30，35，40min取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，加水定容至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，以相應(yīng)加熱時(shí)間的溶劑空白為對(duì)照，在568nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果加熱時(shí)間為30min測(cè)得的吸收值最高。供試品的含量測(cè)定方法：精密量取供試品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入pH8.24的磷酸鹽緩沖液1.0ml和2%的茚三酮溶液2.0ml補(bǔ)水至15.0ml，搖勻，置沸水浴中加熱30min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，加水定容至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，以相應(yīng)的溶劑為空白對(duì)照，在568nm處測(cè)定吸光度。

　　2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取絲氨酸對(duì)照品9.97mg，加水溶解并定容至100ml，作為貯備液。精密吸取絲氨酸對(duì)照品貯備液50ml，加水稀釋至100ml，作為對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密吸取對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液7.0，8.0，9.0，10.0，11.0，12.0ml，按照供試品含量測(cè)定方法項(xiàng)下操作，在568nm處測(cè)定吸光度。以絲氨酸對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，A＝51.3541C－0.5208，r＝0.9999.

　　2.3精密度：實(shí)驗(yàn)精密吸取批號(hào)為040301的同一份供試品溶液5.0ml，按照供試品含量測(cè)定方法項(xiàng)下操作，平行測(cè)定5份，RSD為0.81%，表明本方法精密度良好。

　　2.4穩(wěn)定性：實(shí)驗(yàn)精密吸取批號(hào)為040301的供試品溶液5.0ml，按照供試品含量測(cè)定方法項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度，然后間隔30min重復(fù)測(cè)定1次，結(jié)果表明顯色后的溶液在120min以內(nèi)吸光度值穩(wěn)定。

　　2.5重復(fù)性：實(shí)驗(yàn)取批號(hào)為040301的供試品，按照供試品含量測(cè)定方法項(xiàng)下操作，平行測(cè)定5份，結(jié)果供試品平均含量為：6.272mg/g，RSD為：1.99%，表明本方法重復(fù)性良好。

　　2.6加樣回收：實(shí)驗(yàn)精密稱定批號(hào)為040301的供試品粉末0.35g，平均含量為：6.272mg/g，分別加入濃度為0.828mg/ml的絲氨酸對(duì)照品溶液2.1，2.1，2.6，2.6，3.1，3.1ml，按照供試品含量測(cè)定方法項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度，平均回收率為：99.80%，RSD為：2.06%，表明本方法準(zhǔn)確性良好。

　　2.7含量限度的確定：取10批供試品分別測(cè)定含量，平均含量為43.052mg/袋（每袋2g）。考慮到芋頭產(chǎn)地不同等多種因素的影響，含量限度暫定為：每袋含總游離氨基酸以絲氨酸計(jì)不得少于20mg.

　　3結(jié)果與討論

　　本實(shí)驗(yàn)中絲氨酸對(duì)照品與最大吸收波長(zhǎng)的確定：芋頭含的游離氨基酸中以絲氨酸含量最高。精密吸取絲氨酸對(duì)照品貯備液和供試品溶液各5.0ml，按照供試品含量測(cè)定方法項(xiàng)下操作，在分光光度計(jì)上掃描，得吸收光譜。結(jié)果表明供試品最大吸收波長(zhǎng)568nm，與絲氨酸對(duì)照品完全一致，可以直接用比色法測(cè)定供試品中總游離氨基酸的含量。